Isolasi kafein pada daun teh

Kafein merupakan jenis alkaloid yang secara alamiah terdapat dalam biji kopi,  daun teh, daun mete, biji kola, biji coklat, dan beberapa minuman penyegar. Kafein memiliki berat molekul 194,19 gr/gmol dengan rumus kimia C₈H₁₀N₈O₂ dan pH 6,9 (larutan kafein 1% dalam air). Secara ilmiah, efek langsung dari kafein terhadap kesehatan sebetulnya tidak ada, tetapi yang ada adalah efek tak langsungnya seperti menstimulasi pernafasan dan jantung, serta memberikan efek samping berupa rasa gelisah (neuroses), tidak dapat tidur (insomnia), dan denyut jantung tak beraturan (tachycardia).

(Abraham :2011 )

Pada percobaan isolasi senyawa bahan alam (alkaloid) digunakan daun teh kering, dimana pada daun teh mengandung banyak sekali senyawa metabolit sekunder salah satunya kafein. Kafein termasuk dalam kelompok alkaloid golongan purin, dimana dalam strukturnya banyak mengandung N yang terikat dalam struktur.

Untuk mengisolasi kafein dari daun the kering , 25 gram daun teh kering  ditambahkan 20 gram Na₂CO₃ dan ditambahkan 275 ml air mendidih. Na2CO3 merupakan garam non-polar, yang dapat terurai didalam air menjadi ion Na+ yang mengikat kafein dan CO3- yang mengikat H2O membentuk HCO3 (sutau asam). Garam kafein + Na larut dalam air. Air mendidih yang ditambahkan berfungsi membuka pori-pori dari daun the agar ekstrak daun the dapat keluar dengan sempurna dan kafein yang didapatkan cukup banyak. Larutan bersifat basa karena panambahan Na₂CO₃ yang bresifat basa. Larutan dimasukkan kedalam corong pisah dan ditambahkan 30 ml diklorometan, dikocok kemudian didiamkan , panambahan dikloromaetan berfungsi mengikat kafein yang tadinya berbentuk garam dengan Na+ menjadi berikatan dengan diklorometan, sebab kepolaran kafein hampir sama dengan diklorometan tersebut sehingga kelarutan kafein cukup besar didalam diklorometan (140 mg/l) sementara kelarutan kafein didalam air lebih rendah (22 mg/l). Adanya perbedaan kelarutan, maka terbentuk dua lapisan pada corong pisah, lapisan atas adalah lapisan air dan lapisan bawah adalah larutan diklorometan-kafein.

Penambahan MgSO₄ anhidrat, anhidrat sendiri berarti tanpa air sehingga fungsi MgSO₄ anhidrat ini adalah untuk mengikat air yang masih terbawa dalam larutan diklorometan kaefin, setalah itu didestilasi diatas penangas air. Destilasi ini berfungsi untuk menghilangkan diklorometan (titih didih 80 ⁰C) dan meninggalkan residu kristal berwarna putih kekuningan , dimana kristal tersebut merupakan kafein yang masih kotor. Lalu kedalam kristal ditambahkan aseton panas, aseton ini berfungsi melarutkan kafein dan pengotor yang masih tertinggal, kemudian ditambahkan n-heksana untuk mengikat aseton dan pengotor. Aseton panas merupakan pelarut yang bersifat semi polar namun lebih cenderung ke polar, sehingga aseton dapat berikatan dengan baik dengan n-heksana. Pengkristalan kafein terjadi karena hanya kafein yang bersifat nonpolar dalam campuran tersebut, kristal disaring dengan corong Buchner yang dilapisi dengan kertas saring lalu dipanaskan. Pemanasan pada kristal murni dimaksudkan untuk mendapatkan kristal murni yang kering.

Selanjutnya, pengujian alkaloid untuk kristal yang diperoleh, diambil 10 mg kristal lalu dilarutkan dengan sedikit air kemudian ditambahkan 1-2 tetes pereaksi dragendorf dan menghasilkan larutan berwarna jingga yang menunjukkan adanya alkaloid.